二标准志贺方法氏菌检验

历来以甘露醇和乳糖发酵的志贺特性来区分志贺氏菌的生化群：

A群(痢疾志贺氏菌)：为甘露醇阴性，乳糖阴性。氏菌

B群(福氏志贺氏菌)和C群(鲍氏志贺氏菌)：为甘露醇阳性，标准乳糖阴性。检验

D群(宋内氏志贺氏菌)：为甘露醇阳性，志贺乳糖阳性(或迟缓发酵)。氏菌

(四)血清学性状

志贺氏菌属的标准O抗原(菌体抗原)，在血清学上有重要的检验鉴别意义，该菌属无鞭毛抗原，志贺部分菌株由于K抗原(荚膜抗原)的氏菌存在，阻止了O抗原的标准正常凝集时，可加热处理后，检验再进行凝集试验。志贺A群(志贺氏痢疾菌)包括12个血清型，氏菌其O抗原均具有单一的标准特异性，其中1型即志贺氏痢疾杆菌，2型为斯密氏痢疾杆菌，其他各型国内罕见。B群(福氏志贺氏菌)为1～6型，该群抗原较为复杂，每个血清型具有两种抗原，即型抗原和群抗原，区分亚型和变种，C群(鲍氏志贺氏菌)为1～18型，D群(宋内氏志贺氏菌)只有一个血清型。

三、培养基

(一)GN增菌液

成分：胰蛋白胨20g，葡萄糖1g，甘露醇2g，柠檬酸钠5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸氢二钾4g，磷酸二氢钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.0。

制法：将上述成分配好，加热使溶解，校正pH，分装每瓶225mL，115ºC：高压灭菌15min。

(二)麦康凯琼脂

成分：蛋白胨17g，所胨3g，猪胆盐(或牛胆盐)5g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，乳糖10g，0.01％2吉晶紫水溶液10mL，0.5％中性红水溶液5mL。

制法：将蛋白胨、豚胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH为7.2，将琼脂加入于600mL蒸馏水中，加热溶化，将两液合并，分装烧瓶内，121ºC高压灭菌15min备用，临用时加热溶化琼脂，趁热加乳糖，冷至50～55ºC时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。

注：结晶紫和中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

(三)伊红美蓝琼脂(EMB)

成分：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂17g，2%伊红Y溶液20mL，0.65％美蓝溶液10mL，蒸馏水1000mL，pH7.2。

制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用，临用时加乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

(四)苯丙氨酸培养基

成分：酵母浸膏3g，DL-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸)2g，磷酸氢二钠1g，氯化钠5g，琼脂12g，蒸馏水1000mL。

制法：加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。

试验方法：自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36±1℃培养4h或18-24 h，滴加10％三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

(五)西蒙氏柠檬酸盐琼脂

成分：氯化钠5g，硫酸镁0.2g，磷酸二氢铵1g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸钠5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，0.2％溴麝香草酚蓝溶液40mL，pH6.8。

制法：先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃葑压灭菌：15min，放成斜面。

试验方法：接种培养物，于36±1℃培养4d，每天观察，阳性者斜面上有菌生长，培养基由绿色变为蓝色。

(六)葡萄糖铵琼脂

成分：氯化钠 5g，硫酸镁(MgSO₄·7H₂0)0.2g，磷酸氢二铵1g，磷酸氢二钾1g，葡萄糖2g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，0.2％溴麝香草酚蓝溶液40mL，pH6.8。

制法：先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，加入琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。

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